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NCI-H520人肺鱗癌細胞傳代、復蘇注意要點

NCI-H520人肺鱗癌細胞
Human Lung Squamous Cell Carcinoma ,H520
貨號:YJ-h238(STR鑒定)
價格: 1800.0
規格: 1*10 6              
細胞介紹
NCI-H520細胞是由Gazdar AF等在1982年建系而來,源于鱗狀細胞肺癌組織;NCI-H520細胞p53 mRNA表達水平較正常肺組織低,但是沒有大的結構DNA的異常。NCI-H520細胞角蛋白、波形蛋白陽性,神經絲三聯蛋白陰性;NCI-H520細胞在軟瓊脂中可形成克隆。
細胞特性
1) 來源:人 肺癌組織
2) 形態:貼壁,上皮細胞樣,多角形,緊密排列
3) 含量:>1x10 細胞數
4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途:僅供科研使用。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。 
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
下面T25瓶為例;
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
 
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